時間分辨螢光免疫分析儀是一種採用非放射性同位素免疫分析技術的體外微量分析儀器。根據螢光標記物的螢光光譜的特點，通過延緩測量時間，排除標本中非特異性螢光的干擾，達到準確定量分析的目的。
基本介紹
- 中文名：時間分辨螢光免疫分析儀
- 外文名：Time-resolvedFluorescence Immunoassay Analyzer
發展歷史,結構,基本原理,套用,優缺點,注意事項,拓展閱讀,
發展歷史
1979年，芬蘭Wallac公司研發部的Soini和Hemmila首次提出了建立稀土離子標記物的“時間分辨螢光免疫分析”理論。
1983年，Soini和Kojola首先開發出以鑭系元素為示蹤物的時間分辨螢光測量儀，建立了新的非放射性微量分析檢測技術。同一年，Pettersson等人運用此儀器首次對人絨膜促性腺激素（hCG）進行了時間分辨螢光免疫分析。
1984年，Hemmila確定了DELFIA（解離增強鑭系元素螢光免疫檢測）這種時間分辨免疫分析技術方案，從而使DELFIA成為Wallac的專利技術。
1988年，加拿大CyberFluor公司的Diamandis創立了一種不同於DELFIA的時間分辨螢光免疫分析，即FIAgen（採用的是以Eu3+螯合物配基BCPDA為標記物，通過檢測其與過量Eu3+形成的螯合物螢光進行定量）。
我國起步相對晚一些，在2003年，時間分辨螢光分析技術獲得國家科技進步二等獎。
結構
以某型號時間分辨螢光免疫分析儀為例介紹儀器的基本組成，時間分辨螢光免疫分析儀由樣本處理器和微孔板處理器組成。如圖1所示。
圖1 時間分辨螢光免疫分析儀樣本處理器包括樣本傳送裝置、4根加樣針和注射器、移液臂、稀釋板條、樣本架、質控品架、蠕動泵、探針清洗站等。如圖2所示。
圖2 樣本處理器微孔板處理器主要包括微孔板裝載/卸載裝置、微孔板傳送裝置、微孔板洗滌裝置、增強液加樣器、試劑架及加樣裝置、條形碼掃描器、微孔板振盪器/孵育器等。如圖3所示。
圖3 微孔板處理器基本原理
時間分辨技術，即各種組織、蛋白或其他化合物在激發光的照射下都能發出一定波長的螢光，如血清蛋白可發射出短波長的螢光（激發光波長280nm，發射光波長320~350nm），膽紅素發出波長較長的螢光（激發光波長330~360nm，發射光波長430~470nm），這些螢光為非特異性螢光，干擾了螢光免疫測定的靈敏度和特異性，但它們的螢光壽命一般在1~10ns，最長不超過20ns。而鑭系元素的螢光壽命為10~100µs，時間分辨螢光免疫分析技術（time resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）利用這一特徵，待血清、溶劑和其它成分的短壽命背景螢光完全衰變後，再測量鑭系元素的特異性螢光，有效地排除了非特異螢光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。
套用
優缺點
優點：使用鑭系元素作為標記物，其在保證檢測的靈敏度和特異性的基礎上，通過時間分辨技術消除了背景螢光的干擾。檢測多種抗原時可使用多種螢光素進行標記抗體，且靈敏度（標記物為Eu3+的檢測靈敏度為10-18mol/well）和特異性均較高，較其他分析方法好。還有標準曲線劑量範圍寬、自動化程度高、操作簡便等許多優點。
缺點：試劑盒昂貴和易受內源性或外源性稀土離子的污染。
注意事項
1. 使用環境：將儀器置於水平、穩固、潔淨的地方。自然環境中稀土離子存在十分廣泛，如空氣灰塵和煙霧中，均有不同程度的含量，尤以北方地區為甚，所以應建立一個相對無塵的操作環境，防止器材、試劑和操作者在操作中不慎可能造成的污染。
2. 操作時按照實驗室安全工作準則，戴手套穿工作服，不得戴首飾，以避免潛在的危險；在實驗中應該注意用電安全，不得觸及帶電部分；標本及其他廢棄物的處理應遵守實驗室相關規定，注意生物安全。
3. 嚴格遵守操作規程，如儀器出現故障，立即向管理責任人或科室負責人報告，查明原因，及時處理，不得擅自“修理”，應登記“儀器設備使用登記”本。
4. 當儀器不處於STANDBY或關機狀態時，不能觸及加樣針、攪拌棒等儀器運動部分。
5. 將血清標本吸入樣品杯時，避免產生氣泡或吸入凝塊。
6. 銪標記物是提高靈敏度、降低非特異性結合的關鍵，受標記方法、抗體濃度、稀土元素或其螯合物質量及標記中帶來不均一性影響，每批標記物質量都有一定的差異，因此不同批號標記物敏感性不一，不能混用，且每次測定都需作標準曲線。
7. 時間分辨螢光免疫分析技術的免疫反應與其他免疫反應的條件一樣，易受pH、溫度、時間等因素的影響。且TRFIA的免疫反應是在室溫狀態下不斷振盪完成的，所以反應的室溫等環境影響因素應嚴格控制。
8. TRFIA技術由於靈敏度極高，許多因素能夠影響其準確度，因此在每一步的操作中都應嚴格按照操作規程進行操作。
拓展閱讀
[1] 任冰強,黃立華,黃惠傑.基於免疫層析技術的時間分辨螢光免疫分析儀研究[J].儀器儀表學報,2009,30(06):1330-1335.
[2] 郭東蓉.時間分辨螢光免疫分析儀法與ELISA法檢測B肝兩對半的臨床價值比較[J].世界最新醫學信息文
